Cytosolic Proteasome Enrichment Kit (20 preps), Minute™

Proteasom jest nielizosomalnym układem degradacji białek, który wymaga energii metabolicznej i polimeryzacji ubikwityny. Proteasom 26S składa się z dwóch subkompleksów (proteasomu 20S i jednej lub dwóch cząstek regulatorowych 19S). Szybka i delikatna izolacja proteasomu z komórek/tkanek jest niezbędna do badań struktury i funkcji proteasomu. Stwierdzono, że proteasomy są zlokalizowane głównie w cytozolu, ale także w jądrze. Tradycyjnie najczęstszymi metodami izolacji proteasomów są ultrawirowanie i izolacja powinowactwa. Metody te, choć stosunkowo skuteczne, są zwykle czasochłonne i charakteryzują się niską wydajnością. Wiele metod opartych na powinowactwie wymaga surowych warunków elucji, które mogą wpływać na aktywność izolowanych proteasomów i ograniczać pewne dalsze zastosowania. Aby przezwyciężyć te niedociągnięcia, opracowaliśmy technologię opartą na minikolumnie, wykorzystującą zastrzeżony bufor precypitacyjny do wzbogacania proteasomu z cytozolu poprzez najpierw usunięcie jąder i większości organelli, a następnie preferencyjne wytrącanie proteasomów cytozolowych. W tym zestawie wykluczono proteasomy jądrowe (zestaw do wzbogacania proteasomów jądrowych jest dostępny pod nr kat. PN-041). Protokół jest prosty i szybki z wysoką wydajnością. Łagodny protokół utrzymuje asocjację proteasomów z ubikwityną i innymi białkami. Zestaw ten jest przydatny do badań struktury i funkcji proteasomów. Wzbogacone proteasomy można również stosować jako materiał wyjściowy do oczyszczania metodą powinowactwa.